NY_T 538-2015 鸡传染性鼻炎诊断技术
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ID： |
E51D00592EBC443FA41E987198FFF893 |
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文件大小(MB)： |
0.91 |
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页数： |
15 |
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日期： |
2024-8-14 |
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ics 11.220,B41 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 538—2015,代替 NY/T 538—2002,鸡传染性鼻炎诊断技术,Diagnostic techniques for infectious coryza of chickens,201570-09 发布2015-12-01 实施,中华人民共和国农业部发布,NY/T 538—2015,刖 B,本标准按照GB/T L 1—2009给出的规则起草,本标准提供了几种诊断鸡传染性鼻炎的方法以及抗体检测方法,应根据使用单位的具体情况选择,使用,本标准代替NY/T 538—2002《鸡传染性鼻炎诊断技术》。与NY/T 538—2002相比,除编辑性修,改外主要技术变化如下:,— —删除了琼脂双向双扩散试验和阻断酶联免疫吸附试验（B-ELISA）两种方法（见2002年版的6,和8）；,— —增加了临床诊断（见2）；,— 增加了血凝抑制试验（鉴定副鸡禽杆菌的血清型）（见5）；,— —增加了 B型副鸡禽杆菌的血凝抑制抗体的检测（见7. 2. 1）,本标准由中华人民共和国农业部提出,本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC 181）归ロ,本标准起草单位:北京市农林科学院畜牧兽医研究所,本标准主要起草人:孙惠玲、陈小玲、张培君、苗得园,本标准的历次版本发布情况为:,-------NY/T 538—2002,I,ny/t 538—2015,引 言,鸡传染性鼻炎是由副鸡禽杆菌(AvzZacterzZzw para gallinarum , A />amga必"arzw?)引起的ー?种鸡,急性上呼吸道传染病。本病在世界许多地方都有发生和流行,引起蛋鸡产蛋量下降,育成鸡生长发育受,阻和淘汰率增加,肉鸡肉质下降,造成很大的经济损失,Page分型方法将副鸡禽杆菌分为A、B、C 3种血清型,我国从!980年起就有许多疑似本病的病例,出现。到目前为止,3种血清型引起的发病都有报道,它们具有共同抗原和各自的型特异性抗原,可以,通过检测型特异性抗原来鉴定副鸡禽杆菌的血清型。另外,鸡传染性鼻炎商品化灭活疫苗的免疫接种,十分广泛,应用血清学试验可以检出各型特异性抗体,用来评价疫苗的免疫效果,近10年来,我国的鸡传染性鼻炎疫情又有了新的变化,主要表现在两个方面:ー是目前我国鸡传染,性鼻炎的流行特点发生了变化,除了前些年报道的A型、C型副鸡禽杆菌之外,出现了 B型副鸡禽杆菌,的流行。二是原有标准在抗体的检测上提供了几种方法,但是在鉴定抗原方面提供的方法很局限,基本,上没有提供能够鉴定血清型的诊断方法。为了适应我国标准化工作发展的需要,为鸡传染性鼻炎的诊,断和防控提供技术依据和保障,有必要对NY/T 538—2002进行修订,n,NY/T 538—2015,鸡传染性鼻炎诊断技术,1范围,本标准规定了引起鸡传染性鼻炎的副鸡禽杆菌的诊断技术要求,本标准中规定的临床诊断、细菌分离鉴定、聚合酶链式反应（PCR）技术适用于鸡传染性鼻炎的诊断,血,凝抑制试验（鉴定副鸡禽杆菌的血清型）适用于鉴定菌株的血清型。血清平板凝集试验、血凝抑制试验（检,测副鸡禽杆菌抗体）、间接酶联免疫吸附（ELISA）试验适用于流行病学调查和免疫鸡群抗体的检测,2临床诊断,鸡传染性鼻炎的ー个特征是潜伏期短、发病迅速。最明显的症状是鼻腔有黏液性分泌物流出、面部,水肿、结膜炎以及泪液分泌增多。公鸡有时可见肉垂肿胀。病鸡可出现腹泻、采食和饮水下降,蛋鸡产,蛋下降。发病率高但死亡率低,死亡率可因其他病原继发感染或者混合感染而升高,如果症状全部符合或者有部分符合,则可判为可疑,再进行如下的细菌分离鉴定,3细菌的分离鉴定,3.1 材料准备,3. 1. 1无菌棉拭子、鲜血琼脂平板培养基、无菌鸡血清或牛血清、TSA（胰蛋白陈大豆琼脂,Tryptic Soya,Agar）和TSB（胰蛋白陈大豆肉汤,Tryptic Soya Broth）培养基,3. 1.2产烟酰胺腺瞟吟二核昔酸（NAD,或还原型NAD）表皮葡萄球菌,3.2 操作程序,3.2.1 无菌打开可疑鸡的眶下窦,用灭菌棉拭子蘸取其中黏液或浆液,3.2.2 用棉拭子在鲜血琼脂平板培养基上横向划线5条.7条,然后用接种环取表皮葡萄球菌从横线,中间划ー纵线,3. 2. 3将划好的平皿置于5%的COク培养箱中（37±1）（培养24 h.40 h,3.2.4 观察菌落特点,3.2.5 取菌落做过氧化氢酶试验,必要时通过进ー步的生化反应做详细的特征鉴定。副鸡禽杆菌的生,化反应特点、培养特性及过氧化氢酶试验方法见附录A,3. 2. 6应用PCR方法鉴定可疑菌落,经PCR鉴定正确后,取可疑菌落纯培养物作为攻毒样品进行动,物试验,方法见附录B,3.3结果判定与表示方法,若鲜血琼脂培养基上出现“卫星样”生长的露珠状、针尖大小的小菌落,即靠近产NAD表皮葡萄球菌,处菌落较大,直径可达0. 3 mm,离产NAD表皮葡萄球菌菌落越远,菌落越小,过氧化氢酶阴性,结果判为,阳性,记为“十”;若无卫星现象,但有露珠状、针头大小的小菌落且过氧化氢酶阴性,则需要采用进ー步,PCR或者动物试验鉴定,以避免漏检不需要NAD的副鸡禽杆菌。若无上述现象,则判为阴性,记为“一”,4聚合酶链式反应（PCR）技术,4. 1材料准备,4. 1. 1试验材料,生理盐水、去离子水、琼脂糖、TAE电泳缓冲液、Goldview DNA染料。阴性对照为灭菌去离子水、,1,ny/t 538—2015,阳性对照为副鸡禽杆菌菌株,4. 1.2仪器及耗材,PCR仪、微量加样器、小型高速离心机、电泳仪、水平……
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